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克隆载体和表达载体的区别

作者: 发布人:王甫荣 发布时间:2019-04-21 08:39:08 阅读(17 1.00

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选修3教材上的图(部分)

疑难问题:浙科版教材中没有出现表达载体或克隆载体的表述,只有重组质粒或重组DNA分子,但试题中经常出现这两种术语,如何区分?教材的示意图中也出现了两种情况(如下图所示),经常有学生问到,为什么在图示中会有两种情况?我的解释是一种情况表示克隆,另一种情况表示表达,应该是为了说明不同的过程而分开示意,是不是可以用这两种载体来解释呢?以下内容摘自于《丁香客》论坛。


一、克隆载体


用于在受体细胞中进行目的基因扩增的载体。


作为基因克隆载体至少必须具备3个条件:


1、具有能使外源DNA片段组入的克隆位点。


2、能携带外源DNA进入受体细胞,或游离在细胞质中进行自我复制,或整合到染色体DNA上随染色体DNA的复制而复制。


3、必须具有选择标记,承载外源DNA的载体进入受体细胞后,以便筛选克隆子。


目前已构建应用的基因克隆载体有质粒载体、噬菌体载体、病毒载体、以及由它们互相组合或者与其他基因组DNA组合而成的载体。但是这种载体可能只有复制起始位点而不具备与表达相关的启动子。


分子克隆中最常用的是大肠杆菌,但有时也会用其他微生物作为宿主细胞,所以在构建载体时可以在上面构建第二个复制起始位点,使他在另一个宿主细胞中也能进行复制,这种载体成为穿梭载体。


二、表达载体


表达载体是适合在受体细胞中表达外源基因的载体,包括原核表达载体和真核表达载体。


原核表达载体的要求:


1、有一个强的原核启动子及其两端的调控序列。


2、外源基因上游应有SD序列,而SD序列与起始密码子ATG之间有合适的距离。


3、外源基因插入后有正常的阅读框架。


4、外源基因下游有不依赖与p因子的转录终止子。


真核表达系统有酵母表达系统,哺乳细胞表达系统,昆虫细胞表达系统。真核表达载体大多是穿梭载体,有两套复制原点和筛选标记,一套在大肠杆菌中使用,一套在真核细胞中使用。


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